NIH financuje vývoj chimérického vírusu H5N1, ktorý sa replikuje v ľudských pľúcnych bunkách

Vedci financovaní americkou vládou vyvinuli živý vírus vtáčej chrípky Frankenstein, ktorý rastie v ľudských pľúcnych bunkách, je odolný voči liekom, mutuje, aby sa vyhol očkovaniu, a možno ho študovať mimo prísne strážených laboratórií.

Zhrnutie:

• Vedci tvrdia, že vytvorili živý hybridný vírus s povrchom momentálne nebezpečného vírusu vtáčej chrípky a telom iného živého vírusu.
• Môže infikovať ľudské pľúcne bunky a rásť vo veľmi vysokých koncentráciách.
• Odoláva jednému z najdôležitejších liekov proti chrípke.
• Môže mutovať, aby sa vyhol imunitnému systému – rovnako ako to robia pandemické kmene v prírode.
• Práca sa uskutočnila v niekoľkých amerických laboratóriách v Iowe, Louisiane, Kalifornii a Georgii, ktoré financoval NIH, a možno ju vykonávať aj mimo laboratórií s vysokou úrovňou bezpečnosti BSL-3.

Časopis Journal of Virology publikoval novú štúdiu opisujúcu produkciu „rekombinantného VSV exprimujúceho gény hemaglutinínu (HA) a neuraminidázy (NA) vírusu H5N1 IAV (H5N1-VSV)“ s použitím „izolátu A/Michigan/90/2024 H5N1“.

Jednoducho povedané, to znamená, že výskumníci začlenili vonkajšie povrchové proteíny súčasného vysoko patogénneho vírusu vtáčej chrípky do živej, replikačne kompetentnej kostry vírusu vezikulárnej stomatitídy (VSV).

Replikuje sa v ľudských pľúcnych bunkách v extrémne vysokých titroch

Autori uvádzajú, že vírus H5N1 VSV sa efektívne replikoval v ľudských pľúcnych epitelových bunkách (A549) aj v bunkách obličiek psov Madin-Darby (MDCK) a dosiahol titre 10⁷–10⁸ PFU/ml.

To znamená, že manipulovaný vírus sa dokázal množiť v ľudských pľúcnych bunkách v extrémne vysokých koncentráciách – porovnateľných s plne rozvinutým vírusom H5N1.

H5N1 si zachováva nebezpečné viacbázové štiepne miesto

Štúdia potvrdzuje, že „HA0 bol správne rozštiepený na HA1 a HA2 na viacbázovom mieste.“

Uvádza sa v ňom: „Pokračujúce šírenie H5N1 u hovädzieho dobytka podporuje tento posun a zvyšuje riziko vzniku nových kmeňov so zmeneným spektrom hostiteľov – scenár s významnými dôsledkami pre verejné zdravie.“

Preložené: V laboratóriu bol znovu vytvorený rovnaký druh údajnej evolučnej zmeny, ktorá by mohla zvýšiť pravdepodobnosť infekcie ľudí vírusom H5N1.

Povolené mimo ochranného pásma BSL-3

Asi najalarmujúcejšie vyhlásenie v článku: Táto „platforma umožňuje výskum mimo podmienok BSL-3“.

To znamená, že experimenty s týmto vysoko reprodukovateľným, imunovolatilným chimérickým vírusom H5N1 by sa mohli uskutočňovať v menej bezpečných laboratóriách – čo by výrazne zvýšilo riziko náhodného uvoľnenia, ktoré je pravdepodobne príčinou pandémie COVID-19.

BSL-3 (úroveň biologickej bezpečnosti 3) je najvyšší štandard ochrany pred nebezpečnými, potenciálne smrteľnými patogénmi prenášanými vzduchom. Tento konštrukt H5N1 VSV bol zámerne navrhnutý na štúdium za nižších podmienok ochrany (BSL-2) – napriek tomu, že obsahuje genetické prvky vysoko patogénneho kmeňa vtáčej chrípky.

Dôsledky:

• Zvýšené riziko náhodného uvoľnenia: Laboratóriá BSL-2 sú výrazne početnejšie, menej zabezpečené a menej obmedzujúce ako laboratóriá BSL-3.
• S vírusom pracuje viac ľudí: Menej obmedzení znamená viac laboratórií a výskumníkov s prístupom.
• Možnosť nekontrolovaného šírenia: Vírus môže infikovať ľudské pľúcne bunky a dosiahnuť extrémne vysoké titre.
• Normalizácia rizikového výskumu: Zníženie úrovne bezpečnosti vytvára nebezpečný precedens pre ďalšie experimenty so ziskom funkcie bez najvyššej úrovne ochrany.

Kde bola práca vykonaná:

• Katedra mikrobiológie a imunológie, Univerzita v Iowe, Iowa City, Iowa, USA
• Katedra mikrobiológie a imunológie, Centrum zdravotníckych vied Louisianskej štátnej univerzity, Shreveport, Louisiana, USA
• Infekčné choroby, Inštitút J. Craiga Ventera, La Jolla, Kalifornia, USA
• Oddelenie infekčných chorôb a globálneho verejného zdravia, Lekárska fakulta, Kalifornská univerzita v San Diegu, La Jolla, Kalifornia, USA
• Wertheimova škola verejného zdravia a vedy o ľudskej dlhovekosti, Kalifornská univerzita v San Diegu, La Jolla, Kalifornia, USA
• Diagnostické a výskumné centrum hydiny, Katedra zdravia populácie, Fakulta veterinárneho lekárstva, Univerzita v Georgii, Atény, Georgia, USA

Kto zaplatil?

Autori uvádzajú: „Dr. Balaji Manicassamy je čiastočne podporovaný grantom NIAID R01AI174584.“

NIAID ( Národný inštitút pre alergie a infekčné choroby ) je súčasťou Národných inštitútov zdravia USA (NIH) – projekt bol teda financovaný z peňazí daňových poplatníkov USA.

Riaditeľkou NIAID je Dr. Jeanne Marrazzo a riaditeľom NIH je Dr. Jay Bhattacharya. Obaja podávajú správy ministrovi zdravotníctva a sociálnych služieb (HHS) Robertovi F. Kennedymu ml.

Záver:

Výskumníci vytvorili replikatívny chimérický vírus, ktorý nesie genetické vlastnosti vysoko patogénneho kmeňa H5N1 2024.
Dokázali ho urobiť odolným voči antivírusovým liekom.
Mutovali ho, aby sa vyhol imunitnému systému.
A umožnili s ním pracovať aj mimo podmienok BSL-3.

Toto je presne ten druh experimentu so ziskom funkcie , pred ktorým globálni zdravotnícki predstavitelia už dlho varujú, pretože ak by sa náhodne uvoľnil, mohol by spustiť ďalšiu pandémiu.

Nejde o teoretické riziko, ale skôr o laboratórne vyvinutý, vysoko replikovaný, na cicavce adaptovaný hybrid H5N1, u ktorého sa preukázala schopnosť vyvinúť rezistenciu voči vakcíne – a to za podmienok, ktoré ponúkajú výrazne menšiu ochranu, ako sa bežne vyžaduje pre takýto nebezpečný materiál.

A celú vec financovali americkí daňoví poplatníci – z amerických výskumných inštitúcií.

Všestranná platforma H5N1-VSV pre bezpečné výskumné aplikácie vírusu chrípky

Boopathi Sownthirarajan ¹, Maya Mason ¹, Gayathri Loganathan ¹, Senthamizharasi Manivasagam ¹, Rohit K. Jangra ², Gene S. Tan ^3 4 5, Daniel R. Perez ⁶, Balaji Manicassamy ¹Pridruženia Rozbaliť

• PMID: 40778766
• PMCID: PMC12455992
• DOI: 10.1128/jvi.00975-25

Abstrakt

Kmeň H5N1 vírusu chrípky A (IAV) naďalej spôsobuje závažné infekcie u mnohých druhov vtákov a cicavcov vrátane sporadických, ale znepokojujúcich prípadov u ľudí. Rastú obavy, že cirkulujúce kmene H5N1 by mohli viesť k rozsiahlym prepuknutiam nákazy u ľudí. Výskum vysoko patogénnych vírusov H5N1 je obmedzený na laboratóriá s úrovňou biologickej bezpečnosti 3 (BSL-3). Vakcínové vektory založené na víruse vezikulárnej stomatitídy (VSV) exprimujúce heterológne vírusové proteíny z vírusov Ebola, SARS-CoV-2, Lassa atď. sa predtým ukázali ako bezpečné a účinné v zvieracích modeloch a klinických skúškach na ľuďoch. V tejto práci uvádzame vývoj rekombinantného VSV exprimujúceho gény hemaglutinínu (HA) a neuraminidázy (NA) vírusu H5N1 IAV (H5N1-VSV), ktorý slúži ako všestranná platforma na štúdium rôznych aspektov biológie vírusu H5N1 IAV. H5N1-VSV sa robustne replikoval s titrami porovnateľnými s titrami celého vírusu H5N1 vo viacerých bunkových líniách. U myší bola vakcinácia proti H5N1-VSV bezpečná, vyvolala silnú imunitu a poskytla ochranu proti cirkulujúcemu kmeňu H5N1. Zistili sme, že polymorfizmy v antigénnom mieste Sa cirkulujúcich kmeňov sa objavili pod tlakom imunitného výberu u hovädzieho dobytka, čo pripomína vývoj pandemickej IAV u ľudí. Tieto zistenia naznačujú, že H5N1-VSV môže slúžiť ako bezpečná a prispôsobivá platforma pre výskum chrípky.

Kľúčové slová: H5N1; H5N1-VSV; vektor VSV; vírus chrípky.

Pozrite si tento obrázok a informácie o autorských právach v PMC

Obr. 1 Generovanie rekombinantného VSV exprimujúceho HA a NA z 2024 H5N1. ( 

A ) Organizácia genómu VSV-GFP a H5N1-VSV. ( 

B ) Imunofluorescencia HA a GFP v bunkách A549 infikovaných H5N1-VSV. Bunky boli infikované uvedenými vírusmi (MOI = 1) a 16 hodín po infekcii (hpi) boli bunky fixované a podrobené imunofluorescenčnej analýze. ( 

C ) Kinetika replikácie v bunkách A549 a MDCK. Bunky boli infikované H5N1-VSV (MOI = 0,01) a bola meraná vírusová záťaž v supernatantoch. Údaje sú uvedené ako priemerný titer (PFU/ml) troch vzoriek ± SD. ( 

D ) Western blot pre HA a NA v infikovaných bunkách MDCK. Bunky boli infikované uvedeným vírusom (MOI = 1) a 16 hodín po infekcii boli bunkové lyzáty zozbierané na Western blot analýzu. Nízko patogénny H5N1 je zahrnutý ako kontrola.

Pozrite si tento obrázok a informácie o autorských právach v PMC

Obr. 2 Kinetika replikácie a citlivosť H5N1-VSV na oseltamivir. (A a B) Replikácia H5N1-VSV, H5N1/Tx24 a VSV v bunkách A549 a MDCK. Bunky boli infikované uvedenými vírusmi (MOI = 0,01) a v rôznych časoch po infekcii boli merané vírusové záťaže v supernatantoch. Údaje sú uvedené ako priemerný titer (PFU/ml) troch vzoriek ± SD. (C) Citlivosť rôznych kmeňov IAV na oseltamivir karboxylát. Bunky A549 boli infikované uvedenými vírusmi (MOI = 0,01) a inkubované s rôznymi koncentráciami oseltamivir karboxylátu. Po 48 hodinách po infekcii boli merané vírusové záťaže v supernatantoch. Údaje sú uvedené ako priemerné percento inhibície v porovnaní s DMSO kontrolou troch vzoriek ± SD. Štatistická významnosť bola stanovená jednofaktorovou analýzou rozptylu (ANOVA). * označuje 

P < 0,05 alebo nižšie a ns nevýznamné.

Pozrite si tento obrázok a informácie o autorských právach v PMC

Obr. 3 Ochranná účinnosť očkovania proti H5N1-VSV u myší. (A a B) Neutralizačné titre v sérach po očkovaní. Séra z očkovaných myší boli pred použitím v neutralizačných testoch ošetrené RDE-II. (C až E) Ochrana u očkovaných myší po letálnej infekcii H5N1: (C) úbytok hmotnosti ( 

n = 4–5), (D) prežitie ( 

n = 4–5) a (E) pľúcne titre ( 

n = 4–6). Štatistická významnosť bola stanovená pomocou ANOVA. ∗ označuje 

P < 0,05, ** 

P < 0,01 a ns nevýznamné.

Pozrite si tento obrázok a informácie o autorských právach v PMC

Obr. 4 Imunitná selekcia v antigénnom mieste Sa v izolátoch hovädzieho H5N1. (A) Porovnanie HA sekvencií v súčasnosti cirkulujúcich izolátov H5 a mutantov s únikom z neutralizácie. Hu – ľudský, Ca – hovädzí dobytok a Ms Ab – variant vybraný z polyklonálnych sér myši. Sekvencie GeneBank uvedených kmeňov sú Hu[MI]: XBE32674.1, Ca[MI]: XFE99892.1 a Ca[TX]: XAJ06472.1. (B a C) Štrukturálne modelovanie mutácií v mieste Sa na HA triméri. (B) Pohľad zhora. V pasáži 5 bola mutácia A172T prítomná v štyroch z piatich nezávislých replikátov a mutácia E142K bola prítomná v jednom replikáte. (C) Bočný pohľad.

Referencie

1. 1. Liu G, Cao W, Salawudeen A, Zhu W, Emeterio K, Safronetz D, Banadyga L. 2021. Vírus vezikulárnej stomatitídy: od poľnohospodárskeho patogénu k vakcinačnému vektoru. Pathogens 10:1092. doi: 10.3390/pathogens10091092 – DOI – PMC – PubMed
   1. Roberts A, Buonocore L, Price R, Forman J, Rose JK. 1999. Oslabené vírusy vezikulárnej stomatitídy ako vakcinačné vektory. J Virol 73:3723–3732. doi: 10.1128/JVI.73.5.3723-3732.1999 – DOI – PMC – PubMed
   1. Whitt MA. 2010. Generovanie pseudotypov VSV s použitím rekombinantného ΔG-VSV pre štúdie vstupu vírusu, identifikácie inhibítorov vstupu a imunitných odpovedí na vakcíny. J Virol Methods 169:365–374. doi: 10.1016/j.jviromet.2010.08.006 – DOI – PMC – PubMed
   1. Heaton NS, Leyva-Grado VH, Tan GS, Eggink D, Hai R, Palese P. 2013. In vivo bioluminiscenčné zobrazovanie infekcie vírusom chrípky typu A a charakterizácia nových monoklonálnych protilátok s krížovou ochranou. J Virol 87:8272–8281. doi: 10.1128/JVI.00969-13 – DOI – PMC – PubMed
   1. Wohlbold TJ, Nachbagauer R, Xu H, Tan GS, Hirsh A, Brokstad KA, Cox RJ, Palese P, Krammer F. 2015. Vakcinácia adjuvovanou rekombinantnou neuraminidázou indukuje širokú heterológnu, ale nie heterosubtypickú, krížovú ochranu proti infekcii vírusom chrípky u myší. mBio 6:e02556. doi: 10.1128/mBio.02556-14 – DOI – PMC – PubMed
   1. Gu C, Maemura T, Guan L, Eisfeld AJ, Biswas A, Kiso M, Uraki R, Ito M, Trifkovic S, Wang T, Babujee L, Presler R, Dahn R, Suzuki Y, Halfmann PJ, Yamayoshi S, Neumann G, Kawaoka Y. 2024. 2024. 2024. a Bovine je translovaný ľudský zvierací model. Príroda 636:711–718. doi: 10.1038/s41586-024-08254-7 – DOI – PubMed
   1. Henao-Restrepo AM, Camacho A, Longini IM, Watson CH, Edmunds WJ, Egger M, Carroll MW, Dean NE, Diatta I, Doumbia M a kol. 2017. Účinnosť a účinnosť vakcíny s vektorom rVSV pri prevencii ochorenia vírusom Ebola: konečné výsledky očkovania Guinea Ring, otvorená, klastrová randomizovaná štúdia (Ebola Ca Suffit!). Lancet 389:505–518. doi: 10.1016/S0140-6736(16)32621-6 – DOI – PMC – PubMed
   1. Meakin S, Nsio J, Camacho A, Kitenge R, Coulborn RM, Gignoux E, Johnson J, Sterk E, Musenga EM, Mustafa SHB, Epicentre M, Finger F, Ahuka-Mundeke S. 2024. Účinnosť očkovania rVSV-ZEBOV počas epidémie vírusu Ebola v rokoch 2018 – 2020 v Konžskej demokratickej republike: retrospektívna štúdia s negatívnym výsledkom testu. Lancet Infect Dis 24:1357–1365. doi: 10.1016/S1473-3099(24)00419-5 – DOI – PubMed
   1. Altman MO, Angeletti D, Yewdell JW. 2018. Imunodominancia protilátok: kľúč k pochopeniu antigénneho driftu vírusu chrípky. Viral Immunol 31:142–149. doi: 10.1089/vim.2017.0129 – DOI – PMC – PubMed
   1. York IA, Stevens J, Alymova IV. 2019. N-viazaná glykozylácia vírusu chrípky a vrodená imunita. Biosci Rep 39:BSR20171505. doi: 10.1042/BSR20171505 – DOI – PMC – PubMed
   1. Medina RA, Stertz S, Manicassamy B, Zimmermann P, Sun X, Albrecht RA, Uusi-Kerttula H, Zagordi O, Belshe RB, Frey SE, Tumpey TM, García-Sastre A. 2013. Glykozylácie v globulárnej hlavičke hemaglutinínového proteínu modulujú virulenciu a antigénne vlastnosti vírusov chrípky H1N1. Sci Transl Med 5:187ra70. doi: 10.1126/scitranslmed.3005996 – DOI – PMC – PubMed
   1. Robinson-McCarthy LR, Zirckel KE, Simmons HC, Le Sage V, McCarthy KR. 2025. Replikujúci sa rekombinantný model vírusu vezikulárnej stomatitídy pre evolúciu glykoproteínov vírusu chrípky H5N1 u dojníc. J Virol 99:e0038925. doi: 10.1128/jvi.00389-25 – DOI – PMC – PubMed

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/40778766